李思源 · Biotechnician

在星辉生物科技新药靶点验证组实习期间，独立完成10批次HEK293T细胞传代培养，维持细胞存活率≥95%，为后续基因克隆实验提供稳定细胞基质。

• 主导构建3个候选靶基因的克隆载体，通过PCR扩增与酶切连接将目标片段插入pCDNA3.1质粒，测序验证正确率达100%。

• 采用Western blot与ELISA检测转染细胞中靶蛋白表达水平，累计分析48个样本，确认其中2个靶点表达量较对照组提升4倍以上。

• 系统记录每日实验操作与数据，形成15份标准化实验报告，协助团队将靶点验证周期从8周压缩至6周（缩短25%）。

作为项目负责人，独立设计并构建原核表达载体，通过密码子优化与强启动子替换，使目的蛋白可溶表达量提升至初始方案的3.2倍（达18 mg/L）。

• 针对包涵体问题，系统优化诱导温度（降至25°C）及IPTG浓度（0.1 mM），将可溶性蛋白占比从25%提高至78%，产量达到15 mg/L（每升培养物）。

• 采用Ni-NTA亲和层析结合凝胶过滤两步纯化，获得纯度>95%的目的蛋白；经SDS-PAGE与Western blot验证，确认蛋白分子量正确且具特异性免疫反应，为后续活性检测提供了足量样品。

根据综合成绩排名前10%评选