张思远 · Biotechnician

• 独立完成HEK293和CHO细胞系从复苏到传代、冻存的全程操作，累计培养50余批次，细胞存活率维持在≥95%，为抗体药物研发提供稳定细胞源。

• 优化悬浮培养工艺参数，使目标蛋白表达量从35 mg/L提升至52 mg/L，并成功纯化3种候选抗体的重组蛋白，纯度均＞90%。

• 采用AKTA系统进行亲和层析及离子交换层析，单次纯化周期缩短至4小时，年处理培养上清总量超100 L，回收率稳定在70%～85%。

• 通过Western Blot和ELISA定期检测蛋白表达水平及结合活性，累计完成120余次分析，数据重复性CV＜10%，及时为上游筛选决策提供反馈。

• 协助建立标准化细胞培养与纯化SOP共6份，培训2名新入职助理，使实验室设备故障率降低30%。

• 针对CRISPR/Cas9系统在HEK293T细胞中编辑效率偏低的问题，独立设计并构建了5个靶向不同基因位点的sgRNA质粒，通过优化脂质体转染条件（DNA:转染试剂比1:3），将转染效率从55%提升至82%，流式细胞术分选后绿色荧光阳性比例提高27个百分点。

• 采用流式细胞术分选编辑后细胞，结合T7E1酶切与Sanger测序分析，系统评估了Cas9蛋白表达载体对切割效率的影响，筛选出最优载体组合，使靶基因片段缺失效率从18%提升至35%，重复实验标准差≤3%。

• 为验证编辑稳定性，将单克隆细胞扩增培养4周后提取基因组DNA，通过靶向测序确认编辑持久率>90%，并建立含50株编辑株的细胞库，供后续功能研究使用。

• 针对脱靶风险，利用在线工具设计3对脱靶位点引物，对编辑后细胞进行PCR扩增及Sanger测序，结果显示未检测到非预期编辑（脱靶率<0.1%），确保了实验数据可靠性。

团队项目获得省级三等奖